Описание
Набор для колориметрического анализа NAD+/NADH (WST-8)
Артикул #
E-BC-K804-M
Прибор для определения
Микропланшетный ридер (450 нм)
Метод определения
Колориметрический метод
Информация о продукте
Свойства
Синонимы
NAD+/NADH
Тип образца
Ткани животных, клетки
Чувствительность
0,02 мкмоль/л
Диапазон определения
0,02-5,0 мкмоль/л
Метод определения
Колориметрический метод
Тип анализа
Количественный
Время анализа
70 мин
Точность
Средний межаналитический коэффициент вариации: 9,100% | Средний внутрилабораторный коэффициент вариации: 1,800%
Необходимое дополнительное оборудование
Микропипетка, водяная баня 37℃, фильтрующая трубка 10 KD
Необходимые дополнительные реагенты
PBS (0,01 М, pH 7,4)
Хранение
-20℃
Срок годности
12 месяцев
Разведение образца
Рекомендуемый коэффициент разведения для различных образцов следующий (только для справки):
Тип образца
Коэффициент разведения
10% гомогенат мышечной ткани мыши
1
10% гомогенат почечной ткани мыши
1
Клетки 293T
1
Клетки Hela
1
Примечание: Разбавитель представляет собой экстракционный раствор. Для разведения других типов образцов, пожалуйста, проведите предварительный тест, чтобы подтвердить коэффициент разведения.
Принцип обнаружения
Обнаружение общего содержания NAD+ и NADH. Этанол генерирует ацетальдегид под действием фермента. Тем временем NAD+ восстанавливается до NADH, который под действием передатчика водорода передает электроны WST-8, образуя желтый продукт с характерным пиком поглощения при 450 нм. Таким образом, общее содержание NAD+ и NADH можно количественно определить, измерив значение оптической плотности при 450 нм. Определение NADH. После обработки образца нагреванием на водяной бане при 60°C в течение 30 мин, NAD+ в образце разлагается, и остается только NADH. NADH восстанавливает WST-8, образуя желтый продукт, и количество NADH определяется измерением значения оптической плотности при 450 нм. Определение NAD+ и соотношения NAD+/NADH. Содержание NAD+ и соотношение NAD+/NADH в образце можно получить, исходя из общего содержания NAD+ и NADH, полученного на первых двух этапах, а также отдельного содержания NADPH. Примечание: NADP+ и NADPH не влияют на результаты определения.
Состав набора и условия хранения
Набор
Компонент
Размер (96 лунок)
Хранение
Реагент 1
Экстракционный раствор
2 флакона по 60 мл
-20℃, 12 месяцев
Реагент 2
Буферный раствор
1 флакон по 16 мл
-20℃, 12 месяцев
Реагент 3
Хромогенный агент
1 флакон по 5 мл
-20℃, 12 месяцев, в тени
Реагент 4
Ферментный реагент
2 флакона в порошке
-20℃, 12 месяцев, в тени
Реагент 5
Стандартный
2 флакона в порошке
-20℃, 12 месяцев, в тени
Микропланшет
96 лунок
Не требуется
Запайщик планшетов
2 шт.
Примечание: Реагенты должны храниться строго в соответствии с Условия хранения указаны в таблице выше. Реагенты из разных наборов нельзя смешивать друг с другом. Для небольшого объема реагентов, пожалуйста, центрифугируйте их перед использованием, чтобы не получить недостаточное количество реагентов.
Технические данные:
Параметры:
Внутрилабораторная точность
Три образца ткани почек мышей были проанализированы в 20 повторах для определения точности внутри анализа (CV = коэффициент вариации).
Параметры
Образец 1
Образец 2
Образец 3
Среднее значение (мкмоль/л)
0,55
2,10
4,30
%CV 2,3
1,7
1,4
Межлабораторная точность
Три образца ткани почек мышей были проанализированы 20 раз в двух повторах тремя операторами для определения точности между анализами.
Параметры
Образец 1
Образец 2
Образец 3
Среднее значение (мкмоль/л)
0,55
2,10
4,30
%CV 8,5
9,2
9,6
Восстановление
Возьмите три образца с высокой, средней и низкой концентрацией и протестируйте образцы каждой концентрации 6 раз параллельно, чтобы получить средний коэффициент восстановления 90%.
Стандарт 1
Стандарт 2
Стандарт 3
Ожидаемая концентрация (мкмоль/л)
1,2
2,4
3,8
Наблюдаемая концентрация (мкмоль/л)
1,1
2,2
3,4
Коэффициент восстановления (%)
89
92
89
Чувствительность
Аналитическая чувствительность анализа составляет 0,02 мкмоль/л. Это было определено путем добавления двух стандартных отклонений к среднему значению оптической плотности. Получено при 20-кратном измерении нулевого стандарта и вычислении соответствующей концентрации.
Стандартная кривая
Поскольку значение оптической плотности (OD) стандартной кривой может варьироваться в зависимости от условий фактического проведения анализа (например, оператора, техники пипетирования или температурных эффектов), стандартная кривая и данные приведены ниже только для справки:
Концентрация (мкмоль/л)
0 1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
4,0
5,0
Средняя OD
0,153
0,454
0,584
0,724
0,854
1,103
1,290
1,550
Абсолютная OD
0,000
0,301
0,431
0,571
0,701
0,950
1,137
1,397
При наличии дополнительных параметров, указывайте их в комментарии к заказу: 96 тестов
