Описание
Активность фермента алкогольдегидрогеназы Tribioscience (TBP0053)
Приобретайте продукцию Tribioscience в MSE Supplies по лучшей цене.
Подробная информация о продукте
Форма: Лиофилизированный порошок
Растворимость: Дистиллированная вода или разбавленный буфер
Стабильность: Хранить при -20°C (-4°F)
Активность: 300 Ед/мг белка
Содержание белка: 90-95%
Определение единицы измерения
Количество фермента, катализирующего восстановление одного микромоля NAD+ в минуту при 25°C и pH 8,8.
Метод анализа
Увеличение поглощения при 340 нм, вызванное восстановлением NAD+, является показателем каталитической активности АДГ.
Применение
Фермент присутствует в различных тканях млекопитающих, но в относительно высоких концентрациях обнаруживается в печени и почках. Это цинксодержащий фермент, активируемый глутатионом и ЭДТА и ингибируемый тяжелыми металлами. АДГ из печени лошади имеет молекулярную массу 80 000, тогда как фермент дрожжей — 141 000.
Алкогольдегидрогеназа (EC 1.1.1.1) широко используется для определения этанола в биологических жидкостях. Она также может использоваться в сопряженных ферментативных реакциях для определения метаболитов в биологических жидкостях. Оптимальный pH фермента составляет от 8,6 до 9,0, коэффициент удлинения — 12,6, а изоэлектрическая точка — 5,4. Фермент активируется сульфгидрильными реагентами, такими как меркапэтанол и дитиотреитол.
Реагенты:
0,05 М пирофосфатный буфер натрия, pH 8,8.
96% этанол (субстрат).
0,025 М NAD+ (16,7 мг/мл) в 0,01 М Трис-HCl буфере, pH 7,5. Готовить непосредственно перед использованием.
0,01 М Трис-HCl буфер, pH 7,5, содержащий 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA).
Алкогольдегидрогеназа (фермент) – Растворить достаточное количество фермента в 0,01 М Трис-HCl буфере, содержащем 0,1% BSA, pH 7,5, до концентрации 0,1-0,5 Ед/мл. Готовить непосредственно перед анализом.
Процедура
Установить спектрофотометр (оснащенный терморегулятором) на 340 нм и 25°C.
В кювету пипеткой добавьте следующие реагенты в указанных количествах:
Пирофосфатный буфер натрия 1,4 мл
НАД+ 1,4 мл
Этанол (субстрат) 0,1 мл
Поместите кювету в спектрофотометр при 25°C на 5 минут для достижения температурного равновесия, затем запишите поглощение при 340 нм (контрольный образец).
Начните реакцию, добавив в кювету 0,1 мл раствора АДГ (фермента). Запишите увеличение поглощения при 340 нм в течение 5 минут.
Рассчитайте E340 нм/мин
При наличии дополнительных параметров, указывайте их в комментарии к заказу: 5 KU10 KU
