Описание
Активность фермента лактатдегидрогеназы Tribioscience (TBP0074)
Приобретайте продукцию Tribioscience в MSE Supplies по лучшей цене.
Подробная информация о продукте
Форма: Лиофилизированный порошок
Растворимость: Растворим в дистиллированной воде или разбавленном буфере
Стабильность: Хранить при -20°C (-4°F)
Активность: 350 Ед/мг белка
Содержание белка: 80-90%
Определение единицы измерения
Количество фермента, которое восстанавливает один микромоль пирувата до L-лактата в минуту при 25°C в 0,1 М фосфатном буфере при pH 7,0.
Метод анализа
Скорость уменьшения поглощения при 340 нм, возникающая в результате окисления НАДН, является показателем активности ЛДГ.
Применение
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) (EC 1.1.1.27) катализирует следующую реакцию:
ЛДГ — это метаболический фермент, широко распространенный в природе. У млекопитающих ЛДГ существует в виде пяти тетрамерных изоферментов, состоящих из комбинаций двух различных субъединиц. Изоферменты различаются по физическим, иммунологическим и каталитическим свойствам. Молекулярная масса ЛДГ составляет около 140 000.
ЛДГ имеет клиническое значение, поскольку уровень определенных изоферментов в сыворотке крови указывает на патологические изменения в конкретных тканях. Она также широко используется для определения лактата и в сопряженных системах для обнаружения биологических метаболитов.
Реагенты
0,1 М фосфатный буфер натрия, pH 7,0.
Раствор пирувата натрия (2,5 мг/мл) в дистиллированной воде.
Раствор НАДН (5 мг/мл). Растворите 5 мг НАДН (натриевой соли) в 1,0 мл дистиллированной воды. Всегда готовьте свежеприготовленный раствор.
1% раствор бычьего сывороточного альбумина (БСА). Растворите 1,0 г БСА в 100 мл дистиллированной воды. Альбумин должен быть наивысшей чистоты.
Раствор ЛДГ (0,5-1,0 Ед/мл) – Разведите 0,1 мл суспензии фермента до 5 мл холодным 1% раствором БСА. Используйте аликвоту из этого исходного раствора фермента и разведите до конечной концентрации 0,5-1,0 Ед/мл холодным 1% раствором БСА. Этот раствор необходимо использовать сразу после приготовления и готовить свежеприготовленным для каждого анализа.
Процедура
Настройте спектрофотометр (оснащенный самописцем и регулятором температуры) на 340 нм и 25°C.
В кювету пипеткой добавьте следующее:
0,1 М фосфатный буфер, pH 7,0, 2,7 мл
пируват натрия, 0,1 мл
NADH, 0,05 мл
Перемешайте и инкубируйте при 25°C в течение 5 минут.
Перенесите кювету в спектрофотометр и запишите значение фонового сигнала в течение 2-3 минут.
Пипеткой добавьте 0,1 мл свежего раствора фермента (0,5-1,0 Ед/мл). Перемешайте и наблюдайте за реакцией в течение 5-10 минут при 340 нм.
Рассчитайте (дельта)E340 нм/мин
При наличии дополнительных параметров, указывайте их в комментарии к заказу: 1000 U5000 U
